Przeciwciało monoklonalne przeciwko ludzkiej płytkowej glikoproteinie IIIa wykrywa pokrewne białko w hodowanych ludzkich komórkach śródbłonka.

Wcześniej opisywaliśmy serię przeciwciał monoklonalnych przeciwko glikoproteinom błony płytkowej. Dwa z przeciwciał, B59.2 i B2.12, rozpoznają kompleks glikoproteiny IIb-IIIa. Te dwa przeciwciała reagują specyficznie z glikoproteiną (GP) IIIa, co pokazano na podstawie immunoblottingu żelu z dodecylosiarczanem-poliakryloamidowym żelem solubilizowanych błon płytkowych. Monoklonalny B2.12, ale nie B59.2, wiąże się z hodowanymi ludzkimi komórkami śródbłonka uzyskanymi z żyły pępowinowej, tętnicy biodrowej wewnętrznej ...

Oddziaływanie komórek neutrofil-śródbłonka. Dowody i mechanizmy samoobrony komórek śródbłonka bydła przed stresem oksydacyjnym wywołanym nadtlenkiem wodoru.

Mikrobiologiczne komórki śródbłonka bydła (MEC) były zdolne do degradacji H2O2 wytwarzanego przez aktywowane octanem mirystynianu forbolu bydlęce neutrofile bydlęce lub oksydazę glukozową o maksymalnej zdolności 4,0 +/- 1,2 (SD) nmol / 10 (6) komórek / min, odpowiadające do H2O2 uwalnianego przez około 3 X 10 (6) neutrofili. Degradacja H2O2 następowała przez cykl redoks glutationowy i katalazę. Degradację poprzez cykl redoks glutationowy połączono ze znaczną stymulacją aktywności bocznikowego monofosforanu heksozowego...

Zwiększona sztywność lewej komory upośledza napełnianie psów rozedmą płuc w niewydolności oddechowej.

W przewlekłym psim modelu rozedmy płuc, badaliśmy interakcje między mechaniką lewej komory (LV) a chorobą płuc podczas ciężkiej hipoksemii. Hipoksemia była podobna do tej, która może wystąpić podczas ciężkiego zaostrzenia przewlekłej obturacyjnej choroby płuc. U sześciu psów z rozedmą płuc wywołaną przez papainę i siedmioma psami bez rozedmy płuc, mechanizmy LV zbadano, gdy zainspirowano mieszaninę hipoksycznych gazów do obniżenia PO2 do około 35 mm Hg (badanie niedotlenienia) i w warunkach nietypowych (badanie...

Czynniki genetyczne w metabolizmie lipoprotein. Analiza genetycznego krzyżowania między wsobnymi szczepami myszy NZB / BINJ i SM / J z zastosowaniem kompletnego podejścia do mapy sprzężenia.

Krzyż genetyczny skonstruowano z dwóch rodzicielskich wsobnych szczepów myszy, NZB / BINJ i SM / J, które różnią się znacznie pod względem poziomu lipoprotein w osoczu. Wartości lipidów i apolipoprotein osocza mierzono w 184 potomstwie F2 na normalnej karmie dla dzieci i diecie miażdżycowej. Markery genetyczne były typowane w 126 loci obejmujących wszystkie chromosomy za wyjątkiem Y. Analiza statystyczna ujawniła znaczące powiązanie lub sugestywne połączenie poziomów lipoprotein z markerami na wielu chromosomach. Marke...

Najnowsze zdjęcia w galerii e-gastrolog:

Bezpieczeństwo i immunogenność szczepionki koniugatowej O-polisacharyd A Pseudomonas aeruginosa u ludzi.

Wolny od lipidy A polisacharyd (PS) wyizolowany z lipopolisacharydu Pseudomonas aeruginosa immunotyp 5 (LPS) był kowalencyjnie sprzężony z toksyną A przez redukcyjne aminowanie. Koniugat PS-toksyny A składał się z 29,8% PS i 70,2% toksyny A, o masie cząsteczkowej większej niż 1 X 10 (6), był nietoksyczny dla zwierząt i nie był pirogenny dla królików w dawce 50 mikrogramów / kg ciała wt. po podaniu dożylnym. Koniugat wywoływał jedynie łagodne, przejściowe reakcje po podaniu podskórnym ochotnikom. Szczepionka wywoływa...

Nieprawidłowy metabolizm miedzi i niedobór aktywności oksydazy lizylowej w dziedzicznym zaburzeniu tkanki łącznej.

Nieprawidłowości biochemiczne badano u dwóch braci z przeponami pęcherza moczowego, przepuklin pachwinowych, nieznacznym zwiotczeniem skóry i nadwzrocznością oraz nieprawidłowościami szkieletowymi, w tym egzostozami potylicy. Aktywność oksydazy lizylowej była niska w pożywce hodowanych fibroblastów skóry, czemu towarzyszy zmniejszona konwersja nowo syntezowanego kolagenu do postaci rozpuszczalnej. Stężenie miedzi było znacznie podwyższone w hodowanych fibroblastach skóry, ale zmniejszyło się w surowicy i włosach. Pozi...

Wada w regulacji ekspresji genu II klasy kompleksu głównych tkanek w ludzkich negatywnych limfocytach HLA-DR od pacjentów z zespołem złożonych niedoborów odporności.

Pacjenci z autosomalnym recesywnym połączonym niedoborem odporności charakteryzują się HLA-ujemnym fenotypem aktywowanych limfocytów T i B. Aby określić molekularne podstawy tego zespołu, zbadaliśmy biosyntezę antygenów klasy I i II oraz ekspresję odpowiednich genów u tych pacjentów. Synteza ciężkiego łańcucha HLA A, B i C jest znacznie zmniejszona, podczas gdy mikroblobulina beta 2 jest wytwarzana w normalnych ilościach. Biosynteza łańcucha alfa i łańcucha alfa HLA-DR jest znoszona w limfocytach tych pacjentów i is...

Przechowywanie płytek krwi powoduje redystrybucję cząsteczek glikoproteiny Ib. Dowody na dużą pulę wewnątrz płytkową glikoproteiny Ib.

Glikoproteina błony komórkowej (GP) Ib zawiera receptor dla czynnika von Willebranda i trombiny. Jego proteolityczny fragment, glikokalicyna, krąży w normalnym osoczu. W tym badaniu przechowywanie koncentratów płytek przez 5 dni spowodowało zwiększenie glikokalicyny w osoczu o 221% (1,3-krotność całkowitej ilości glikokalicyny obecnej na powierzchni wszystkich płytek krwi), ogólny wzrost GPIb na powierzchni płytek o 8% i pojawienie się powierzchniowej subpopulacji płytek ujemnej pod względem GPIb. Całkowita zawartość GP...

Wadliwe przetwarzanie prekursora insuliny-receptora w hodowlanych limfocytach od pacjenta z ekstremalną opornością na insulinę.

Zbadaliśmy pacjenta z ekstremalną opornością na insulinę, rogowaceniem nerek i zmniejszoną insulinowiążącą erytrocytem. Transformowane EBV limfocyty od tego pacjenta wykazywały znacząco zmniejszone wiązanie insuliny 125I. Radioaktywacja receptorów powierzchniowych komórek, a następnie immunoprecypitacja przeciwciałami antyreceptorowymi ujawniła obecność zwiększonych ilości białka 210 kD, ale nie wykryto podjednostek alfa lub beta. Ciągłe znakowanie 2- [3H] mannozą ujawniło syntezę prekursora 190 kDa i białka 210...

Defekt biosyntezy mitochondrialnego acetyloacetylo-koenzymu A-tiolazy w hodowanych fibroblastach od chłopca z niedoborem 3-ketotiolazy.

Etiologię niedoboru 3-ketotiolazy przypisano defektowi mitochondrialnej tioazy acetoacetyl-CoA, ponieważ aktywność tiolazy acetoacetyl-CoA w pokrewnych materiałach nie jest aktywowana przez K +, właściwość charakterystyczną dla tego enzymu. Przebadaliśmy białko enzymatyczne i biosyntezę mitochondrialnego tioazolu acetoacetyl-CoA, stosując hodowane fibroblasty skóry u 5-letniego chłopca z niedoborem 3-ketioliolozy. Następujące wyniki zostały osiągnięte, (a) Aktywacja aktywności tiolazy acetoacetyl-CoA przez K + była ze...

Bromodeoksyurydyna w guzach i chromosomach wykrywana za pomocą przeciwciała monoklonalnego.

Stosując przeciwciało monoklonalne do bromodeoksyurydyny (BUdR) i immunohistochemię, zmierzyliśmy inkorporację tego analogu tymidyny do DNA normalnych i złośliwych komórek człowieka eksponowanych in vivo. BUdR podawany w postaci stałej infuzji dożylnej przez 12 lub 24 h dziennie przez okres do 13 dni powodował w stanie stacjonarnym poziom 10 (-6) M podczas infuzji. Wykazaliśmy szerokie włączenie BUdR do obu normalnych komórek skóry, normalnego szpiku kostnego i komórek czerniaka złośliwego. Ponadto infuzja BUdR była odp...

Cykliczne nukleotydy osłabiają zmiany wywołane przez trombinę w parametrach płytek Antyport Na / H. Rola cytozolowego Ca.

W pracy tej badaliśmy rolę cyklicznych nukleotydów w modulowaniu parametrów anty-kranu Na / H w ludzkich płytkach krwi. Nitroprusyd sodu i iloprost, jak również cykliczne analogi nukleotydów, zastosowano do podniesienia poziomu cAMP i cGMP w komórkach. Cykliczne nukleotydy odwracały wywołane przez trombinę przesunięcie zasadowe w cytosolowym punkcie nastawy pH i aktywność antyportu Na / H, jednocześnie z atenuacją indukowanego trombiną wzrostu wolnego Ca w cytozolu. Nie zaobserwowano wpływu cyklicznych nukleotydów na pł...

Właściwości przeciwmalaryczne wielonienasyconych kwasów tłuszczowych n-3 i n-6: działanie in vitro na Plasmodium falciparum i działanie in vivo na P. berghei.

Wielonienasycone kwasy tłuszczowe dokozaheksaenowy (C22: 6, n-3), kwas eikozapentaenowy, kwas arachidonowy i kwas linolowy powodowały wyraźne hamowanie in vitro Plasmodium falciparum, oceniane za pomocą testu radiometrycznego. Natomiast pomijalne zabijanie pasożytów zaobserwowano dla kwasu oleinowego lub kwasu dokozowego. Uśmiercanie pasożytów znacznie wzrosło, gdy zastosowano utlenione formy wielonienasyconych kwasów tłuszczowych. Antyoksydanty znacznie zmniejszyły zabijanie wywołane kwasem tłuszczowym. Myszy zakażone P. be...

Zwiększone ilości poliamin mogą obniżyć produkcję interleukiny 2 w reumatoidalnym zapaleniu stawów.

Poliaminy zmniejszają reaktywność immunologiczną. RA jest związane ze zmniejszoną produkcją IL 2. W tym badaniu przedstawiamy dowody sugerujące, że nadmierne poliaminy mogą przyczyniać się do niedoboru IL 2 w RA. Blokowanie wytwarzania poliaminy za pomocą inhibitorów dekarboksylazy ornityny prowadzi do zwiększonej produkcji IL 2 przez PBMC RA. Ponadto, inhibitory oksydazy poliaminowej (PAO) i katalazy również zwiększają wytwarzanie IL 2 przez PBMC RA. Ten efekt hamowania PAO jest zależny od monocytów. Po 3 dniach hodowl...

Wnioskowanie o molekularnej wadzie apolipoproteiny B w hipobetalipoproteinemii za pomocą analizy sprzężeń w dużej rodzinie.

Heterozygotyczna hipobetalipoproteinemia charakteryzuje się zmniejszeniem stężenia cholesterolu LDL w osoczu, całkowitych triglicerydów i apo B do mniej niż 50% wartości prawidłowych. Molekularne podstawy tego zaburzenia pozostają nieznane. Fenotyp ulega kosegregacji z haplotypem DNA genu apo B w rodowodzie Idaho, z maksymalnym logarytmem dziesiętnym wskaźnika stosunku (LOD) wynoszącym 7,56 przy szybkości rekombinacji równej zero. Osoby niosące ten haplotyp miały całkowity poziom cholesterolu 96 mg / dl, poziomy cholesterol...

Tłumaczenie i stabilność mRNA ludzkiej globiny w oocytach Xenopus.

Ludzki matrycowy RNA (mRNA) przygotowany z komórek erytroidalnych pacjentów z niedokrwistością sierpowatych komórek został przetłumaczony na oocyty Xenopus laevis. Dodanie heminy do wstrzykniętego mRNA powoduje wzrost całkowitej syntezy globiny i stosunek alfa do syntezy beta-globiny (stosunek alfa / beta) do zbliżenia się do jedności. Aby określić wpływ długości segmentu poli (A) na stabilność mRNA ludzkiej globiny, mRNA 10S globiny frakcjonowano na frakcje poli (A) -pochodne przez chromatografię kolumnową oligo (dT) -...

Regulacja C / EBP beta genu alfa czynnika martwicy nowotworów.

Aktywowane makrofagi przyczyniają się do przewlekłego stanu zapalnego poprzez wydzielanie cytokin i proteinaz. Czynnik martwicy nowotworu alfa (TNF alfa) jest szczególnie ważny w tym procesie ze względu na jego zdolność do regulowania innych mediatorów stanu zapalnego w autokrynny i parakrynny sposób. Mechanizm (y) odpowiedzialny za regulację TNF alfa specyficznej dla typu komórek nie jest znany. Prezentujemy dane wykazujące, że ekspresja TNF alfa jest regulowana przez czynnik transkrypcyjny C / EBP beta (NF-IL6). C / EBP beta...

Lipoproteina małpy Rhesus (a) wiąże się słabiej niż lizyna Sepharose i U937 z komórkami monocytoidalnymi niż ludzka lipoproteina (a). Dowód na dominującą rolę kringle 4 (37).

Lipoproteina rezusa (a) (Lp [a]) wiąże się mniej wydajnie niż ludzka Lp (a) z lizyną-Sepharose i hodowanymi komórkami U937. Badania z wykorzystaniem fragmentów plazminogenu pochodnych elastazy wykazały, że w tych interakcjach nie wymaga ani kringle 5, ani domeny proteazy Lp (a), co wskazuje na zaangażowanie regionu K4. Porównawcze analizy strukturalne zarówno ludzkiej, jak i małpiej apo (a) domeny K4, wraz z badaniami modelowania molekularnego, poparły wniosek, że K4 (37) odgrywa dominującą rolę w funkcji wiązania lizyny ...

Różnicowy wpływ różnych izoform płytkowego czynnika wzrostu na chemotaksję fibroblastów, monocytów i granulocytów.

Zbadano aktywności chemotaktyczne trzech różnych izoform płytkopochodnego czynnika wzrostu (PDGF) na fibroblastach, monocytach i granulocytach pochodzenia ludzkiego. PDGF-AB i PDGF-BB indukowały silne, zależne od dawki odpowiedzi zarówno na fibroblasty jak i monocyty, podczas gdy PDGF-AA nie stymulował chemotaksji tych typów komórek. Zamiast tego, PDGF-AA hamował chemotaktyczną aktywność PDGF-AB i PDGF-BB na fibroblastach i monocytach. Jednak PDGF-AA nie był w stanie blokować chemotaksji monocytów indukowanej przez FMLP. Na...

Zwiększona ekspresja i funkcja receptorów fibronektyny VLA-4 na ludzkich aktywowanych limfocytach T w reumatoidalnym zapaleniu stawów.

Integryna VLA-4 (CD49d / CD29) jest receptorem powierzchni komórkowej zaangażowanym w interakcję komórek limfoidalnych zarówno z macierzą pozakomórkową (ECM), jak i komórkami śródbłonka. Zbadaliśmy ekspresję i funkcję receptorów fibronektyny VLA-4 (FN) na limfocytach T zlokalizowanych w zapalnej błonie maziowej u pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów (RA). Wysoki odsetek limfocytów T zarówno w błonie maziowej (SM), jak i mazi stawowej (SF) wyrażał antygeny aktywacyjne AIM (CD69) i gp95 / 85 (Ea2), a także zwi...

Ligacja kompleksu receptora komórek T powoduje aktywację kaskady Ras / Raf-1 / MEK / MAPK w ludzkich limfocytach T.

Stymulacja komórek T za pomocą przeciwciał skierowanych przeciwko kompleksowi receptora komórek T powoduje aktywację kinazy białkowej związanej z mitogenem (MAPK). W innych typach komórek opisano dwa szlaki, które mogą prowadzić do aktywacji MAPK. Jeden z tych szlaków obejmuje aktywację Ras, prowadząc do aktywacji Raf-1, a następnie aktywacji MEK (kinazy MAPK lub ERK). Zbadano udział tej drogi w limfocytach T w aktywacji MAPK za pośrednictwem anty-CD3 lub aktywowanej octanem forbolu (PMA). Wykryliśmy aktywność kinazy Raf...

Interleukina 1 sprzyja adhezji komórek nowotworowych do hodowanych ludzkich komórek śródbłonka.

Podajemy, że IL 1 działa na śródbłonek, wywołując długotrwały wzrost jego adhezji do komórek nowotworowych. Selektywna obróbka wstępna ludzkich komórek śródbłonka żyły pępkowej (EC) z IL 1 powodowała znaczny wzrost adhezji trzech linii komórkowych ludzkiego raka jelita grubego (HT-29, HCC-P2988 i HCC-M1410) i jednego ludzkiego czerniaka (A-375 ) linia komórkowa. Czynnik martwicy nowotworu (TNF) był równie skuteczny jak IL 1 w promowaniu adhezji komórek nowotworowych do EC, podczas gdy IFN gamma i IL2 były nieaktywn...

Rodzinna kardiomiopatia przerostowa jest genetycznie heterogenną chorobą.

Wykazujemy, że rodzinna przerostowa kardiomiopatia (FHC), autosomalne dominujące zaburzenie mięśnia sercowego, jest genetycznie heterogenną chorobą. Miejsce odpowiedzialne za FHC u członków jednego dużego pokolenia zostało niedawno zmapowane na chromosomie 14q11-12 (FHC-1). Scharakteryzowaliśmy trzy dodatkowe niespokrewnione rodziny, w których gen FHC oddziela się jako autosomalna dominująca cecha, aby określić, czy te loci chorobowe są również mapowane na FHC-1. Wszyscy członkowie rodziny zostali przebadani klinicznie n...

Rekombinowany ludzki czynnik martwicy nowotworów-alfa. Regulacja powinowactwa i funkcji receptora N-formylometionylolucyklofenyloalaniny na ludzkich neutrofilach.

Preinkubacja neutrofili rekombinowanym ludzkim czynnikiem martwicy nowotworów-alfa (rH TNF-alfa) wzmacniała późniejsze uwalnianie anionu ponadtlenkowego w odpowiedzi na różne stężenia N-formylometionylolucylofenyloalaniny (FMLP). Zwiększone wytwarzanie anionu ponadtlenkowego było widoczne przez 5 minut i osiągnęło plateau o 15 minut. Nie tylko całkowita ilość uwolnionego anionu ponadtlenkowego była większa, ale szybkość uwalniania została również zwiększona trzykrotnie przez rH TNF-alfa. Przeciwnie, rH TNF-alfa zmnie...

Dowód, że glikoproteina o masie cząsteczkowej 210 000 (GP 210) służy jako płytkowy receptor Fc.

Wcześniej zidentyfikowaliśmy glikoproteinę płytkową o wielkości 210 000 moli (GP 210), która nie występuje w płytkach Bernard-Soulier, i stwierdziła, że przeciwciało przeciwko GP 210 hamuje wywołaną ristocetyną aglutynację płytek krwi. Pokazujemy teraz przez immunoblot, że GP 210 wiąże sprzężone cieplnie królicze i ludzkie IgG, jak również hemocyjaninę skałoczepu (KLH) -anti-KLH i kompleksy odpornościowe ovalbumin (OA) -anti-OA. Wiązanie kompleksu immunologicznego z GP 210 było zachowane na płytkach potraktowa...

Interleukina 1 stymuluje wytwarzanie czynnika aktywującego płytki krwi w hodowanych ludzkich komórkach śródbłonka.

Stwierdzono, że interleukina 1 pochodząca z monocytów (IL-1) jest silnym induktorem czynnika aktywującego płytki (PAF) w hodowanych ludzkich komórkach śródbłonka naczyniowego (HEC). Produkt zidentyfikowano jako PAF poprzez jego zachowanie w układach chromatograficznych, odzyskanie aktywności biologicznej i jego właściwości fizyko-chemiczne oraz podatność na lipazy. Odpowiedź HEC na IL-1 była zależna od stężenia, stała się bardziej widoczna po upływie 2 godzin i zmniejszona po 18 godzinach inkubacji. Większość wytw...

Czynnik stymulujący kolonię granulocytów i makrofagów. Wrażliwa i zależna od receptorów regulacja za pomocą 1,25-dihydroksywitaminy D3 w prawidłowych ludzkich limfocytach krwi obwodowej.

Pokazujemy, że 1,25-dihydroksywitamina D3 (1,25 [OH] 2D3), najbardziej hormonalnie aktywny metabolit witaminy D3, moduluje czułą i swoistą akumulację białek i matrycowego RNA wielowierszowego czynnika wzrostu stymulującego kolonie granulocytów i makrofagów czynnik (GM-CSF). Regulację ekspresji GM-CSF obserwuje się zarówno w normalnych ludzkich limfocytach T aktywowanych mitogenem, jak i limfocytach T z linii (S-LB1) transformowanej ludzkim limfotropowym wirusem limfocytów T 1 (HTLV-1). Przeciwnie, komórki z linii limfocytów T...

Aktywowana przez naskórkowy hydrolizę fosfoinozytydów w hodowanych szczurzych wewnętrznych komórkach rdzeniowych zbierających kanaliki. Regulacja przez białko G, wapń i kinazę białkową C.

Epidermalny czynnik wzrostu (EGF) wykazuje specyficzne nasycalne wiązanie z hodowanymi wewnętrznymi rdzeniowymi komórkami kanalików hodowlanych szczura i stymuluje wytwarzanie trisfosfonianu inozytolu (IP3) przez te komórki w sposób zależny od dawki. Stymulacja EGF stymulowana przez IP3 jest wzmacniana przez GTP gamma s lub AIF4- i jest hamowana przez GDP beta lub toksynę krztuścową. Zmiany w zewnątrzkomórkowym Ca2 + nie mają wpływu na produkcję IP3 stymulowaną przez podstawną lub stymulowaną EGF. Podobnie, leczenie EGTA, ...

Śmierci komórkowej śledziony limfocytów B jest zapobiegane przez uwalnianie tlenku azotu poprzez mechanizmy wiążące się z utrzymującymi się poziomami Bcl-2.

Inkubacja dojrzałych limfocytów B hodowanych ex vivo w obecności tlenku azotu lub substancji będących donorami tlenku azotu opóźnia zaprogramowaną śmierć komórki, co określa się przez pojawienie się drabiny DNA w elektroforezie w żelu agarozowym lub przez analizę metodą cytometrii przepływowej DNA. Tlenek azotu również ratuje limfocyty B przed apoptozą indukowaną antygenem, ale nie zapewnia sygnału kostymulującego, który przekształca sygnał wywołany przez antygen w odpowiedź proliferacyjną. Ochronne działanie ...

Bezpośrednie zapisy temperatury w drzewie tracheoskronowym u normalnego człowieka.

W celu ustalenia, jak głęboko wdychane powietrze może przedostać się do dróg oddechowych przed doprowadzeniem do warunków ciała, zmierzyliśmy temperaturę w drogach oddechowych przedniego odcinka podstawnego prawego dolnego płata u pięciu normalnych osobników, podczas gdy oni oddychali powietrzem w temperaturze poniżej zera i warunki otoczenia. Podczas spokojnego oddychania większość ogrzewania dostarczanego gazu odbywała się w górnych drogach oddechowych zgodnie z oczekiwaniami. Jednak wraz ze wzrostem obciążenia termi...

Regulacja tworzenia hemoglobiny AIc w ludzkich erytrocytach in vitro. Wpływ czynników fizjologicznych innych niż glukoza.

Tworzenie się hemoglobiny AIc badano w nienaruszonym ludzkim erytrocytach in vitro. Opracowano zadowalające metody utrzymywania erytrocytów w warunkach fizjologicznych przez ponad 8 dni z hemolizą poniżej 10%. Poziom hemoglobiny AIc oznaczano chromatograficznie na hemolizatach erytrocytów po usunięciu odwracalnych składników przez inkubację przez 6 hw 37 stopniach C. Stężenie hemoglobiny AIc wzrastało liniowo z czasem podczas 8 d inkubacji. Szybkość tworzenia hemoglobiny AIc wzrastała liniowo wraz ze wzrostem stężenia gluk...

Klonowanie i ekspresja zmutowanej mutacji metylomalonylo-koenzymu A o zmienionym powinowactwie do kobalaminy, które powoduje kwaśny zanik metylometylowy.

Wyraźne genotypowe i fenotypowe postacie niedoboru apoenzymu zmutowanego metylmalonylo-CoA (MCM) można wyznaczyć przez analizę biochemiczną zmutowanych fibroblastów. Jedna forma, oznaczona mut-, wyraża fenotyp, w którym resztkowa aktywność enzymu jest widoczna w hodowanych komórkach eksponowanych na wysokie stężenia hydroksykobalaminy. Opisujemy klonowanie cDNA MCM z komórek wykazujących mutację fenotypową i charakterystykę zmutowanego produktu genu poddanego nadmiernej ekspresji w pierwotnych ludzkich fibroblastach mutowa...

Możliwy mechanizm komórkowy do skurczu naczyń mózgowych po doświadczalnym krwotoku podpajęczynówkowym u psa.

Badanie to przeprowadzono w celu zbadania niektórych komórkowych mechanizmów jonowych odpowiedzialnych za skurcz naczyń mózgowych, który występuje w następstwie krwotoku podpajęczynówkowego (SAH). Po cysternalnej iniekcji autologicznej krwi udokumentowaliśmy skurcz tętnicy podstawnej podczas angiografii od 4 do 7 dni po zabiegu u sześciu psów. Po wyizolowaniu tych tętnic podstawnych obserwowaliśmy znaczną depolaryzację błony i zwiększoną aktywność spajków elektrycznych w porównaniu z kontrolami. Nachylenie potencja...

Stężenie czynnika stabilizującego prostacyklinę jest identyczne z apolipoproteiną AI (Apo AI). Nowa funkcja Apo AI.

Czynnik stabilizujący PGI2 w surowicy (PSF) oczyszczono z ludzkiej surowicy do pojedynczego białka o masie cząsteczkowej 28 000 D metodą SDS-PAGE. Analizy sekwencji końca NH2 (32 reszty), sekwencji końca COOH (3 reszty) i skład aminokwasów ujawniły jego homologię z ludzką apolipoproteiną AI (Apo AI), główną apolipoproteiną HDL. Apolipoproteiny A-II, CI, C-II, C-III, D i E, a także LDL i VLDL nie miały tej aktywności. Struktura alfa-helisy Apo AI jest niezbędna do wiązania PGI2. HDL i powstająca HDL odtworzona z Apo AI ...

Faza I: Badanie czynnika stymulującego wzrost kolonii granulocytów u pacjentów z przejściowym rakiem komórkowym nabłonka dróg moczowych.

Rekombinowany ludzki czynnik stymulujący kolonie granulocytów (rhG-CSF) podawano w dawce 1-60 mikrogramów / kg masy ciała 22 pacjentom z przejściowym rakiem komórek przed chemioterapią w ramach badania fazy I / II. U wszystkich pacjentów obserwowano zależne od dawki zwiększenie bezwzględnej liczby neutrofilów (ANC) o 1,8 - 12-krotnie. Dodatkowo, temu zwiększeniu w ANC towarzyszył wzrost alkalicznej fosfatazy leukocytów, markera tworzenia się wtórnych granulek. U sześciu z ośmiu analizowanych pacjentów zaobserwowano wzros...

Rola białek nośnikowych w surowicy w metabolizmie obwodowym i rozmieszczeniu tkankowym hormonów tarczycy w rodzinnej hipertoksyksymii dysbbuminowej i wrodzonym podwyższeniu globuliny wiążącej tyroksynę.

Aby zbadać rolę globuliny wiążącej tyroksynę (TBG) i albuminy w dostępności hormonów tarczycy do tkanek obwodowych, wykonano kompleksowe badania kinetyczne tyroksyny (T4) i trijodotyroniny (T3) u ośmiu osób z rodzinną hipertoksyksemią dysbbuminową (FDH) , u czterech osób z odziedziczonym nadmiarem TBG iu 15 osób zdrowych. U osób z wysokim odsetkiem TBG redukcja klirensu osoczowego T4 i T3 (odpowiednio o 51% i 54%) wiązała się z normalną codzienną produkcją; Objętości dystrybucji T4 i T3 zostały znacznie zmniejszone...

Wada epitopu receptora dopełniacza 3 u pacjenta z układowym toczniem rumieniowatym.

Receptor 3 receptora dopełniacza (CR3) ulega ekspresji na komórkach układu siateczkowo-śródbłonkowego i bierze udział w usuwaniu kompleksów immunologicznych. W tym artykule opisano pacjenta z niedoborem miejsca wiązania C3bi tego receptora. Klinicznie pacjent ten przejawiał głównie skórne objawy tocznia rumieniowatego układowego z zapaleniem naczyń i zapaleniem paniculitis. Niedobór epitopu CR3 wykazano za pomocą cytometrii przepływowej. Funkcjonalne znaczenie tej wady wykazano w próbie rozetowej z erytrocytami obciążon...

Wydzielanie lipazy lipoproteinowej przez ludzkie makrofagi pochodzące z monocytów.

Ludzkie makrofagi pochodzące z monocytów w hodowli wytwarzały lipazę lipoproteinową. Chociaż świeżo wyizolowane monocyty krwi nie wydzielały znacznej aktywności lipazy, 1 d w hodowli była wystarczająca do wywołania mierzalnej produkcji enzymu. W ciągu 3 tygodni w hodowli maksymalna aktywność została osiągnięta po 7 dniach. Przez cały czas pożywka hodowlana zawierała więcej aktywności enzymatycznej niż eluat surowicy-heparyny lub ekstrakt detergentowy warstwy komórkowej. Aktywność lipazy stymulowano surowicą i ha...

Kultura in vitro komórek eksfoliowanych w moczu przez pacjentów z cukrzycą.

Jako podejście ułatwiające zrozumienie postępu cukrzycowej choroby nerek, ocenialiśmy mocz chorych na cukrzycę i normalnych ochotników na obecność komórek, które można hodować in vitro. Wyniki sugerują, że zarówno normalna grupa kontrolna jak i pacjenci z cukrzycą, bez klinicznie wykrywalnej mikroangiopatii, złuszczają kilka komórek w moczu. W przeciwieństwie do tego, chorzy na cukrzycę z udokumentowaną retinopatią, ale bez nefropatii złuszczają znacznie większą liczbę komórek zdolnych do hodowli (5,2 komórek ...

Klonowanie limfocytów T z odrzuconych alloprzeszczepów ludzkiej nerki. Częstotliwość wzrostu i analiza funkcjonalna / fenotypowa.

Mechanicznie zebrane limfocyty atakujące nieodwracalnie odrzucony ludzki przeszczep allogenny nerki zaszczepiono w warunkach ograniczonego rozcieńczenia w celu obliczenia częstotliwości rosnących prekursorów. Optymalną częstotliwość wzrostu (1/13) uzyskano, gdy transformowane limfocyty B dawcy Epstein-Barr (EBV) zastosowano jako stymulatory (D-BLCL) w obecności interleukiny 2 (IL-2). 55 analizowanych klonów obejmowało wszystkie T11 + i T3 +, a wszystkie eksprymowane antygeny DR (45% stanowiły T8 + i 55% T4 +). Tylko jeden klon...

Stężenie interleukiny 6 w surowicy, silny czynnik wzrostu komórek szpiczaka, jako odzwierciedlenie ciężkości choroby w dysracjach komórek plazmatycznych.

Stosując specyficzny i bardzo czuły test biologiczny (1 pg = 1 U), badaliśmy obecność IL-6, silnego czynnika wzrostu komórek szpiczaka, w surowicach 131 osobników z dyskrazjami komórek plazmatycznych. 22 miało gammapatię monoklonalną o nieokreślonym znaczeniu (MGUS), 13 miało tlący się szpiczak (SMM), 85 miało jawny szpiczak mnogi (MM), a 11 miało białaczkę z komórek plazmatycznych (PCL). Znaczące poziomy IL-6 w surowicy wykryto tylko w 3% grupy MGUS / SMM, ale w 35% jawnej grupy MM i 100% grupy PCL. Podczas jawnego MM,...

Autoimmunologiczne limfocyty T w myasthenia gravis. Określanie docelowych epitopów przy użyciu linii T i rekombinowanych produktów mysiego nikotynowego genu receptora acetylocholinowego.

Oligoklonalne i sklonowane linie T z krwi obwodowej lub grasicy chorych z myasthenia gravis (MG) wybrano do reaktywności wobec nikotynowych receptorów acetylocholinowych (AChR) z Torpedo california lub przeciwko rekombinowanemu peptydowi fuzyjnemu, X4, reprezentując zewnątrzkomórkową część mysiego AChR. łańcuch alfa. Wszystkie linie komórkowe wyrażały fenotyp błony komórkowej CD4, a ich reaktywność antygenowa była blokowana przez przeciwciała przeciwko monomorficznym determinantom HLA DR / DP. Używając panelu białek f...

Izolacja i częściowa charakterystyka białek wiążących Fc gamma ludzkich leukocytów.

Wyizolowaliśmy i częściowo scharakteryzowaliśmy trzy makrocząsteczki wiążące Fc z ludzkich leukocytów. Jednojądrzaste komórki od zdrowych osób i od pięciu pacjentów z przewlekłą białaczką limfocytową i neutrofilami od zdrowych dawców były znakowane izotopowo za pomocą 125I i laktoperoksydazy. Po solubilizacji komórek przez detergent makrocząsteczki wiążące gamma Fc oczyszczono za pomocą powtarzalnej chromatografii powinowactwa w różnych warunkach i analizowano za pomocą elektroforezy na żelu poliakryloamidowy...

beta-zero-talasemia na Sardynii jest spowodowana mutacją nonsensowną.

Przedstawiamy charakterystykę zmiany molekularnej beta-talasemii na Sardynii. Talassemia beta w tym obszarze jest głównie typu beta zero z niskim poziomem mRNA beta-globiny. Test translacyjny tego informacyjnego RNA w systemie bezkomórkowym wykazał syntezę łańcucha beta-globiny tylko z dodatkiem bursztynowego (UAG) supresorowego transferu RNA. Dwuniciowy komplementarny DNA przygotowany z mRNA retikulocytów od pacjenta z Sardynii został sklonowany w bakteryjnym plazmidzie i izolowany i sekwencjonowany klon zawierający komplementar...

Wpływ transportu anionów organicznych Cl w krótkookresowych hodowlach hepatocytów szczura i izolowanej perfuzji wątroby szczura.

Transport sulfobromoftaleiny znakowanej 35S [35S] BSP badano w krótkoterminowych hodowanych hepatocytach szczurzych inkubowanych w albuminie surowicy bydlęcej. W temperaturze 37 stopni C początkowy pobór [35S] BSP był 5-10-krotnie większy niż w 4 ° C, liniowy przez co najmniej 15 minut, nasycalny, hamowany przez bilirubinę i zmniejszony o więcej niż 70% po wyczerpaniu ATP lub substytucji izosmotycznej. sacharozy dla NaCl w pożywce. Zastąpienie Na + przez K + lub Li + nie zmieniło wychwytu, podczas gdy zastąpienie Cl- przez HC...

Pancytopenia jako zaburzenie klonalne multipotencjalnej hematopoetycznej komórki macierzystej.

Hematopoezę badano u 14-letniej dziewczynki, która miała 2-letnią historię stabilnej bezobjawowej pancytopenii i która była również heterozygotyczna w miejscu strukturalnym dla dehydrogenazy glukozo-6-fosforanowej (G-6-PD). Nie było dowodów morfologicznych ani cytogenetycznych na obecność preleukemii ani sugestii anemii Fanconiego. W limfocytach T z owłosionymi erytrocytami skóry i owcy stosunek aktywności G-6-PD A / B wynosił 1: 1. Jednak tylko aktywność typu B stwierdzono w erytrocytach krwi obwodowej, granulocytach i p...

Dowody, że ograniczenie dyfuzji określa kinetykę wychwytu tlenu podczas wysiłku u ludzi.

Aby określić rolę O2 w tętnicach na mechanizmie wykorzystania O2 mięśni, zbadaliśmy wpływ 2, 11 i 20% karboksyhemoglobiny (COHb) na wychwyt O2 (VO2) i kinetę wyjściową CO2 (VCO2) w odpowiedzi na 6 min. o stałym cyklu umiarkowanym i intensywnym cyklu u 10 osób. Zwiększony COHb nie wpłynął na spoczynkowe tętno, VO2 lub VCO2. Co więcej, COHb nie wpływał na asymptotyczny VO2 w odpowiedzi na ćwiczenia. Jednakże kinetyka VO2 i VCO2 była zmieniona w różny sposób. Stała czasowa (TC) VO2 znacznie wzrosła wraz ze wzrostem...

Wydzielanie amylazy z trzustki szczura i jej selektywna utrata po traktowaniu streptozotocyną.

Amylin, peptyd skorelowany z insuliną w granulkach beta-komórek, zmierzono w wycieku perfundowanych trzustek szczurów za pomocą nowo opracowanego specyficznego testu radioimmunologicznego. Jego wydzielanie jest podobne do wydzielania insuliny w odpowiedzi na 20 mM glukozy, 10 mM argininy lub ich połączenie. Względną molową ilość wydzielanej amyliny oszacowano na 25-37% insuliny. Leczenie ograniczoną do diabetyków dawką streptozotocyny zmniejszyło odpowiedź amylinową bez znaczącej zmiany odpowiedzi insuliny. Ciężko diabet...

Sprzężenie bodźce-wydzielanie indukowanego glukozą uwalniania insuliny. Metaboliczne i funkcjonalne działanie NH4 + w wysepkach szczurzych.

NH4 + powodował zależne od dawki, szybkie i odwracalne hamowanie uwalniania insuliny stymulowanej glukozą przez wyizolowane wysepki szczurzego. Hamował on także wydzielanie insulunu stymulowane gliceralemem, Ba2 + i sulfonylomocznikiem. NH4 + nie wpływał na wykorzystanie glukozy i utlenianie, stymulowaną glukozą biosyntezę proinsuliny, stężenie ATP, AD i AMP oraz wewnątrzkomórkowe pH. NH4 + również nie wpływał na zdolność teofiliny i cytochalazyny B do wzmacniania indukowanego glukozą uwalniania insuliny. Jednakże w ob...

Szlaki przetwarzania prekursora gastryny w błonie śluzowej szczura.

Prekursor gastryny hormonu stymulującego wydzielanie kwasu powoduje powstanie wielu peptydów różniących się znacznie pod względem aktywności biologicznej, ale odpowiednie szlaki biosyntezy są słabo poznane. Zastosowaliśmy przeciwciała przeciwko amidowanym gastrynom, gastrynom z końcowymi C-końcowymi gastrynami glicynowymi (Gly) z hydroksyglicyną na końcu COOH (GlyOH) i końcem COOH progastryny, do immunoprecypitacji peptydów znakowanych [35S] siarczanem lub [3H] tyrozyny podczas inkubacji śluzówki antralnej szczura in vit...

Degradacja parathormonu i produkcja fragmentów przez wyizolowaną perfundowaną nerkę psa. Wpływ szybkości filtracji kłębuszkowej i stężenia CA ++ w perfuzacie.

Badano nerkową degradację nienaruszonego hormonu przytarczycznego bydła (b-PTH 1-84) z izolowaną perfundowaną nerką psa. Zanikanie b-PTH 1-84 z perfuzatu występowało równocześnie z pojawieniem się postaci o mniejszej masie cząsteczkowej immunoreaktywnego parathormonu (PTH). Te fragmenty PTH o mniejszej masie cząsteczkowej obejmowały zarówno karboksylowe, jak i aminowe regiony peptydu PTH. Perfuzat z nerek o niższym wskaźniku przesączania kłębuszkowego (GFR) zawierał b-PTH 1-84 przez dłuższy okres czasu niż nerki z wy...

Przeciwciała Herpes ciążowe rozpoznają ludzki antygen naskórkowy o masie 180 kD.

Herpes gestationis (HG) jest domniemaną autoimmunologiczną pęcherzową dermatozą ciąży, która ma wiele ustaleń z pęcherzykowym pemfigoidem (BP), chorobą osób starszych. Badanie to identyfikuje po raz pierwszy antygen wykryty przez autoprzeciwciała HG i porównuje go z rozpoznanym przez autoprzeciwciała BP. Surowice od 16 HG i 17 pacjentów z BP oraz od zdrowych kobiet w ciąży oceniano za pomocą badań immunofluorescencyjnych (IF) i immunoblot z ludzkimi ekstraktami naskórkowymi. 89% surowic HG z krążącymi przeciwciałami...

Przyspieszone przenoszenie estrów cholesterolu w osoczu dyslipidemicznym. Rola białka transferowego estrów cholesterolu.

Estry cholesterolu w osoczu, syntetyzowane w lipoproteinach o dużej gęstości (HDL), mogą być przenoszone na inne lipoproteiny za pomocą białka przenoszącego ester cholesterolu (CETP). Stwierdzono dwukrotny wzrost transferu masy estru cholesterolu z HDL do lipoprotein zawierających apoB w inkubowanym hipercholesterolemicznym króliczym osoczu w porównaniu z kontrolą. Wystąpił dwu- do czterokrotny wzrost aktywności CETP, mierzony w teście izotopowym w osoczu hipercholesterolemicznym. Cząsteczka podobna do CETP została wyizolo...

Uwalnianie insuliny jest specyficzną anomeryczną glukozą u człowieka.

Anomer ?-glukozy powoduje większe uwalnianie insuliny niż beta-glukoza w różnych modelach zwierzęcych. Te anomery glukozy rozpuszczono szybko i podano dożylnie ludziom ochotnikom w wysokiej dawce (0,5 g / kg) w okresie 3 minut lub niskiej dawki (3,5 g) przez okres 20 sekund. Próbki krwi pobierano w częstych odstępach czasu w celu pomiaru stężenia glukozy w pełnej krwi (żelazicyjanek), glukozy w osoczu (beta-glukozowej oksydazy) i immunoreaktywnej insuliny w surowicy. Test wysokiego infuzji nie wykazał różnic między anomami ...

Biosyntetyczne i strukturalne badania białek o ciężkim łańcuchu

Nowe białko o ciężkim łańcuchu (? HCD-JM) zostało scharakteryzowane za pomocą kryteriów antygenowych i strukturalnych. Białko należy do podklasy IgG3 i jest blisko spokrewnione z fragmentem Fc immunoglobulin G3. Dominującym N-końcowym aminokwasem tego białka jest kwas glutaminowy w postaci niecyklizowanej, a inny? HCD jest glicyną. Badania N-końcowych peptydów wskazują, że N-końcowa część łańcucha ciężkiego polipeptydu A3 jest nieobecna w JHCD-JM. Wyniki te wykluczają proces normalnej inicjacji ciężkiego łańcu...

Układ białkowy stymulujący adypsynę i acylację oraz regulacja wewnątrzkomórkowej syntezy triglicerydów.

Wcześniej charakteryzowaliśmy aktywność ludzkiego osocza, która znacząco stymuluje syntezę triglicerydów w hodowanych fibroblastach ludzkiej skóry i ludzkich adipocytach. Na podstawie jego aktywności in vitro nazwaliśmy aktywne białko stymulujące acylację (ASP). Określono molekularną tożsamość aktywnego składnika surowicy. Analiza sekwencji NH2-końcowych, spektroskopia masowa jonowo-natryskowa i analiza składu aminokwasowego wskazują, że aktywne oczyszczone białko jest fragmentem trzeciego składnika dopełniacza, C...

Tłumienie wytwarzania androgenów przez hormon uwalniający hormon D-tryptofan-6-luteinizujący u człowieka.

Czterech mężczyzn transseksualnych otrzymało superwytentowy analog hormonu uwalniającego hormon luteinizujący (LHRH), D-tryptofan-6-LHRH w dziennych dawkach 100 mikrogramów przez 3 - 6 miesięcy. Zaobserwowano zmniejszenie wzrostu brody, trądziku i siły erekcji; ten ostatni został obiektywnie udokumentowany nagraniami nocnych epizodów tumescencji prącia. Poziom testosteronu i dihydrotestosteronu w osoczu spadł do wartości kastracyjnych; poziomy podstawowej prolaktyny i hormonu luteinizującego wykazywały niewielki spadek, podc...

Lokalizacja miejsca wiązania tkankowego aktywatora plazminogenu z fibryną.

Funkcjonalnie aktywne łańcuchy A i B oddzielono od dwułańcuchowej postaci rekombinowanego tkankowego aktywatora plazminogenu po łagodnej redukcji i alkilowaniu. Stwierdzono, że łańcuch A jest odpowiedzialny za wiązanie z lizyną-Sepharozą lub fibryną, a łańcuch B zawierał katalityczną aktywność tkankowego typu aktywatora plazminogenu. Znaczna redukcja dwułańcuchowego tkankowego aktywatora plazminogenu zniszczyła jednak zarówno aktywność wiążącą, jak i katalityczną. Fragment termolityczny, Fr. 1, z tkankowego akty...